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植物核糖体提取试剂盒用简便快速的方法即可快速提取得到植物核糖体。
本试剂盒适用于提取新鲜植物叶片样本的核糖体，用于冻存样本的提取时核糖体回收率较低。
本试剂盒提取的核糖体具有生物活性，可以用于核糖体功能研究、核糖体蛋白提取等各种下游应用。
本试剂盒采用非酶法的快速提取方法，可以在一小时内快速提取得到核糖体，但是回收率比酶法核糖体提取试剂盒稍低。需要酶法提取试剂盒可以选择其他货号的试剂盒（相关产品HR8210），酶法提取得到的核糖体回收率会有增加，但是耗时较长。请根据不同的需要选择试剂盒。

组份	50T	100T
试剂A：植物核糖体提取液A	100mL	200mL
试剂B：植物核糖体提取液B	25mL	50mL
试剂C：核糖体蛋白提取液C	10mL	20mL
试剂D：蛋白酶抑制剂	100μL	200μL

提取液2～8℃保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存。有效期1年。
注：
● 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2～8℃保存，开盖使用后-20℃保存。
● 蛋白酶抑制剂在2～8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。


离心机，振荡器，匀浆机/匀浆器，涡旋混匀器，移液器，细胞筛（100μm），PBS缓冲液(pH7.4)，蛋白定量试剂盒


● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

• 提取液准备：
  每200μL冷的总蛋白提取液中加入1μL蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。
  注：
  ● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
  ● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
  ● 蛋白样品用于测定某些细胞内蛋白酶、磷酸酶活性等下游实验时，注意根据实际情况调整抑制剂混合物是否加入。
  ● 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。
  
• 取500mg～1g新鲜植物样本叶片，洗净擦干后去除叶梗和粗脉。用手术剪刀尽可能剪碎。
  
• 加入2mL试剂A，用匀浆机/匀浆器/组织搅碎机充分匀浆。
  注：
  ● 处理叶片等组织如果没有匀浆机，也可先加少量试剂A后用Dounce匀浆器充分匀浆后再加试剂A混匀。
  ● 可以将叶片组织在液氮中冷冻后捣碎成细的粉末后再加入匀浆液进行匀浆。
  
• 将匀浆液用100μm细胞筛过滤。
  注：
  ● 没有细胞筛的话，在4℃，稍微静置，让粗纤维，成团组织块等沉降，或者以低于100×g力条件下离心1分钟，收集细胞上清，弃大块组织沉淀。
  ● 有些含黏液较多的样品可能难以吸取，可以将1mL吸头尖稍微剪掉一点使用。
  
• 将滤液在500×g条件下离心5分钟，弃沉淀，收集上清。
  
• 将上清在1000×g条件下离心10分钟，弃沉淀，收集上清。
  
• 在上清中加入0.5mL提取液B，充分混匀。
  
• 置振荡器振荡20分钟。
  注：
  ● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
  ● 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。
  
• 在2000×g力离心5分钟。弃沉淀，收集上清。
  
• 将上清在5000×g力离心5分钟。弃沉淀，收集上清。
  
• 将上清在10000×g力离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
  
• 将上清在4℃，100000×g力条件下离心60分钟。弃上清，收集沉淀。
  注：
  ● 如果条件允许，可将离心时间延长到2～24小时。
  ● 液体量较少无合适转头时，可将小管套入大离心管进行离心，或用PBS补充量后用合适的离心管离心。
  
• 弃上清，在沉淀中加入100μL核糖体蛋白提取液C，充分混匀。
  
• 在4℃条件下振荡20～30分钟。
  注：
  ● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
  ● 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。
  
• 在4℃，10000×g条件下离心5分钟。
  
• 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核糖体蛋白。
  
• 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
  注：
  ● 建议用BCA法进行蛋白定量。
  ● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

● 蛋白浓度低？
植物核糖体蛋白丰度比较低，在条件允许的情况下，需要尽可能加大样品的上样量以提高蛋白浓度。
● 用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
● 提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
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